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RAPD分子標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)原理及操作流程

發(fā)布時(shí)間:2015/5/5點(diǎn)擊次數(shù):1573

RAPD技術(shù)的全稱是隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA),此技術(shù)建立于PCR基礎(chǔ)之上,使用一系列具有10個(gè)左右堿基的單鏈隨機(jī)引物,對(duì)基因組的DNA全部進(jìn)行PCR擴(kuò)增,以檢測(cè)多態(tài)性。由于整個(gè)基因組存在眾多反向重復(fù)序列,因此須對(duì)每一隨機(jī)引物單獨(dú)進(jìn)行PCR,單一引物與反向重復(fù)序列結(jié)合,使重復(fù)序列之間的區(qū)域得以擴(kuò)增。引物結(jié)合位點(diǎn)DNA序列的改變以及兩擴(kuò)增位點(diǎn)之間DNA堿基的缺失、插入或置換均可導(dǎo)致擴(kuò)增片段數(shù)目和長(zhǎng)度的差異,經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分離后通過(guò)EB染色以檢測(cè)DNA的片段的多態(tài)性。

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